Листерия сваб
Гигиенический контроль листерии на поверхности
Особенности и преимущества
Концепция

Листерия сваб создан, чтобы минимизировать риск контаминации рабочей поверхности и конечной продукции листериями, преимущественно L. Monocytogenes. Тест основан на гидролизе листериями эскулина, содержащегося в среде. В результате в среде появляется характерный преципитат черного цвета.
Сваб
Наконечник сваба, используемый в тесте, содержит кальция альгинат. Химический состав наконечника разработан с таким условием, чтобы при погружении в селективную питательную среду он полностью растворялся. За счет этого мы можем обеспечить непосредственный прямой контакт микроорганизмов, собранных во время проведения теста, с селективной средой.
Селективная среда
В Листерия Свабе используется, как основа среда, сходная с селективным Оксфорд агаром. Тест также основан на гидролизе листериями эскулина. В среде содержатся добавки, ингибирующие рост других бактерий и грибов похожие на добавки в Оксфорд агаре, но более устойчивые.
В среде в присутствии листерий появляется характерная черно-коричневая преципитация, такая же, как в Оксфорд агаре.
N.B. Некоторые Грам + кокки могут выживать в данной среде, но они не составляют проблемы при определении листерии, так как они медленно растут и не гидролизуют эскулин.
Проведение теста
Чувствительность и специфичность сваб – теста
Листерия Сваб был тестирован в лабораторных условиях путем инокулирования большого количества свабов с разными микроорганизмами, имеющими различное содержание колонеобразующих единиц в образцах (108, 105,103 и 10 КОЕ на сваб).
Образцы были помещены в свабы и росли в течении 72 часов для определения ложно позитивных и ложно негативных результатов.
Результаты представлены в таблице (№1)
Микроорганизмы |
КОЕ в образце |
изменение цвета |
Listeria monocytogenes NCTC 11994 |
7 |
черный |
Listeria monocytogenes NCTC 5214 |
19 |
черный |
Listeria monocytogenes NCTC 7973 |
15 |
черный |
Listeria ivanovii |
10 |
черный |
Listeria innocua NCTC 11288 |
9 |
черный |
Listeria seeligeri |
1х104 |
черный |
Listeria Welshimeri NCTC 11857 |
1х103 |
черный |
Listeria murrayi - |
1х105 |
черный |
Listeria grayii |
1х105 |
черный |
Staphylococcus aureus NTCT 6571 |
4х108 |
без изменения |
Streptococcus Faecalis NCTC 775 |
1,5х105 |
без изменения |
Aeromonas hydrophila NCTC 1767 |
1,5х107 |
без изменения |
Bacillus subtilis NCTC 10400 |
4х107 |
без изменения |
Bacillus pumilis NCTC 10327 |
1х107 |
без изменения |
Bacillus cereus NCTC 10320 |
2х106 |
без изменения |
Escherichia coli NCTC 9001 |
1х107 |
без изменения |
Escherichia coli NCTC 10418 |
6х107 |
без изменения |
Klebsiella pneumoniae |
3х107 |
без изменения |
Klebsiella aerogenes NCTC 7418 |
1х108 |
без изменения |
Klebsiella aerogenes NCTC 11228 |
3х107 |
без изменения |
Proteus vulgaris NCTC 1683 |
1х106 |
без изменения |
Proteus mirabilis NCTC 841 |
5х108 |
без изменения |
Citrobacter freundii |
1,2х108 |
без изменения |
Citrobacter diversus |
3х106 |
без изменения |
Enterobacter agglomerans |
1,1х108 |
без изменения |
Morganella morganii |
1,4х108 |
без изменения |
Serratia liquefacens |
1х108 |
без изменения |
Serratia marcescens |
1х107 |
без изменения |
Yersinia enterolytica |
1х107 |
без изменения |
Enterobacter cloacae |
3х107 |
без изменения |
Salmonella typhimurium NCTC 74 |
3х108 |
без изменения |
Shigella flexneri |
8х106 |
без изменения |
Pseudomonas aerugenosa |
9х107 |
без изменения |
Pseudomonas putida |
1,5х107 |
без изменения |
Pseudomonas flourescens NCTC10038 |
1х107 |
без изменения |
Pseudomonas maltophillia NCTC 102157 |
6х107 |
без изменения |
Pseudomonas vesicularis NCTC 10900 |
4х106 |
без изменения |
Pseudomonas cepacia NCTC 10743 |
3,5х107 |
без изменения |
Pseudomonas putrefaciens NCTC 10735 |
3х106 |
без изменения |
Candida albicans |
2х106 |
без изменения |
Такая же процедура была выполнена и с использованием различной молочной продукции. Результаты этих тестов соответствуют тем, которые приведены в таблице №1.
Окончательно листерия в различных продуктах питания, была тестирована в сравнении с традиционной методикой определения (с использованием предселективного и селективного бульона, а затем среды Оксфорд или Палкам). В результате сравнения этих методик была получена 97.2% корреляция результатов, основанных на 197 негативных и 53 позитивных образцах.
Процедура контроля качества
Тестирование селективного агента
Для тестирования используется ряд микроорганизмов (36 микроорганизмов вносятся в минимальной ингибирующей концентрации) включающий:
2 L. Monocytogenes, 1 L. Inocua, 10 Грам +, 20 Грам – и 3 вида дрожжей.
Тестирование окончательного продукта (Листерия Сваба)
Листерия Сваб тестируется используя стандартную тест процедуру
При контроле тестируются микроорганизмы в низкой концентрации 108 -109 КОЕ/ мл, что соответствует стандарту мутности в 0,5 McFarland. Суспензия листерии разводится в 10-3, 10-2 и далее до концентрации . 10 – 102, 103- 104, 105- 106 КОЕ/ мл.
Микроорганизмы, использовавшиеся для процедуры контроля качества
Микроорганизмы |
Тип |
Listeria monocytogenes |
NCTC 11994 |
Listeria monocytogenes |
NCTC 5214 |
Listeria monocytogenes |
NCTC 7973 |
Listeria innocua |
NCTC 11288 |
Listeria grayii |
NCTC 10815 |
Staphylococcus aureus |
NTCT 6571 |
Staphylococcus aureus |
|
Lactobacillus acidophilus |
|
Klebsiella aerogenes NCTC 11228 |
NCTC 11228 |
Все L. monocytogenes, L. innocua, L. ivanovii при тестировании дали изменение цвета во всех разведениях. Только L. grayii (не связанная с человеческими заболеваниями) показывает положительный результат лишь при высокой концентрации. Не листерии не дают позитивных результатов на данной среде (в любой концентрации).
Инструкция по использованию
Тест процедура
1. Снимите обертку и выньте сваб и культуральную тубу.
2. Обработайте свабом исследуемую поверхность (100 см2 , участок 10 х10 см)
3. Снимите колпачок с культуральной тубы и выкиньте его.
4. Всавъте сваб в культуральную тубу и погрузите сваб в питательную среду целиком
5. Произведите контрольную запись на тубе
6. Инкубируйте при 37 0С в течение 48 часов.
7. Интерпретация результатов: Положительный результат, свидетельствующий о наличии листерии, характеризуется изменением цвета агара со светло-коричневого на черный или темно-коричневый. Почернение начинается вокруг наконечника, которым производился забор пробы. Негативный результат – нет изменения цвета.
8. Запишите результаты и утилизируйте тубы.
Стерилизация
Листерия Сваб стерилизуется облучением.
Сроки годности
Срок годности составляет 12 месяцев от даты производства и указан на тубе и упаковке.
Хранение
Листерия Сваб должен храниться в сухом месте при температуре +5 – 250С.
Не замораживать.
